Рекомендация
Студентам
Вы можете использовать данную статью как часть или основу своего реферата или даже дипломной работы или своего сайта
Просто перейдите по ссылке ниже, редактируйте статью, все картинки тоже доступны, все бесплатно
Редактировать статью?!
Скачать статью в формате PDF
Сохраните результат в MS Word Docx или PDF, делитесь с друзьями, спасибо :)
Категории статей
Изучение репаративного остеогенеза с использованием стромальных клеток костного мозга для замещения дефектов костной ткани в эксперименте
Победитель конференции стендовых докладов на Международном конгрессе по эстетической имплантации в Санкт-Петербурге (4-6 апреля 2008 года)
Т.В. Колесникова, З. Раад, Г.П. Пинаев, Н.С. Николаенко
Санкт-Петербургский медицинский университет им. акад. Павлова, кафедра хирургической стоматологии и челюстно-лицевой хирургии, Институт цитологии РАН, отдел клеточных культур (Санкт-Петербург)
Проблема восстановления дефектов костной ткани является актуальной не только для травматологии и ортопедии. В стоматологии и челюстно-лицевой хирургии поиск путей оптимизации репаративного остеогенеза связан, в первую очередь, с бурным развитием имплантологии, совершенствованием хирургических вмешательств по поводу разнообразных стоматологических заболеваний (периодонтиты, кисты, пародонтиты). Разнообразие и многочисленность остеопластических материалов, представленных на стоматологическом рынке, скорее указывают на их недостатки, чем на достоинства. В связи с этим в настоящее время среди методов хирургического лечения костных дефектов начинают применять эффективные методы костной пластики, включающие использование культивируемых остеогенных клеток, способствующих ускорению процесса регенерации кости. Источником биопсийного материала является костный мозг, а также фрагменты губчатых костей. Ранее для аутологичных пересадок в небольшие костные раны были использованы стромальные клетки костного мозга в виде суспензии. Однако, следуя основной концепции тканевой инженерии (реконструкция тканей и органов на основе создания гистотипических структур с соблюдением принципов пространственного и функционального подобия), клетки необходимо сочетать с различными веществами-носителями, свойства которых могут оказывать влияние на пролиферацию и дифференцировку клеток. Целью нашего исследования явилось изучение репаративного остеогенеза с использованием СКК в сочетании с коллагеновым гелем при замещении дефектов костной ткани.
Задачи исследования
1. Отработка методов выделения стромальных клеток, полученных методом пункции.
2. Изучение формирования и морфофункциональная характеристика остеобластического фенотипа in vitro в клеточных культурах.
3. Изучение морфологических изменений, протекающих при репаративном остеогенезе при использовании стромальных клеток костного мозга в сочетании с коллагеновым гелем.
4. Изучение особенностей репаративного остеогенеза на 30-е, 90-е, 180-е сутки при использовании стромальных клеток в сочетании с коллагеновым гелем.
Методы исследования
Работа выполнена на кроликах породы шиншилла (n=9), возраст животных составил 3 месяца, вес около 3 кг.
Этапы эксперимента
1. Забор костного мозга из гребня подвздошной кости путем пункции.
2. Выделение и культивирование стромальных клеток костного мозга (СКК) in vitro.
3. Введение СКК + коллагеновый гель в костный дефект (опытная серия), введение коллагенового геля в костный дефект (контроль). Для предотвращения интерпозиции мягких тканей использовали нерезорбируемую мембрану на основе ПТФЭ.
4. Биопсия для последующего гистологического исследования осуществлялась на 30-е, 90-е, 180-е сутки.
Культивирование клеток
Полученные кусочки кости промывали в фосфатном буфере без добавления Са и Мg и очищали от остатков соединительной ткани. Далее применяли трехкратную последовательную ферментативную обработку в растворе трипсина (0,05%) и ЭДТА (0,02%) и засевали в пластиковую культуральную посуду. Клетки культивировали в среде альфа-MEM с добавлением 20%-ной сыворотки эмбрионов коров и гентамицина сульфата (50 мкг/мл). Клетки растили в СО-инкубаторе при 5%-ной концентрации углекислого газа. Смену среды производили через каждые 3 суток. После первой смены среды в нее добавляли аскорбиновую кислоту (50 мкг/мл).
Характер формирования клеточного монослоя оценивали с помощью инвертированного микроскопа.
Биопсию костной ткани осуществляли по стандартной методике.
Анализ полученных данных показал, что на 30е сутки после введения СКК наблюдались новообразованные тонкие костные балки губчатого вещества с явлениями созревания, в то время как в контроле наблюдалась губчатая ткань незрелого волокнистого типа. Оценка результатов на дальних сроках (6 месяцев) показала, что в контроле наблюдалось замедление процессов созревания костной ткани. В опытной группе нижняя челюсть была представлена зрелой компактной костью пластинчатого строения без признаков дистрофических изменений.
Выводы
1. На основании полученных гистологических данных можно сказать, что стромальные клетки костного мозга в сочетании с коллагеновым гелем оказывают оптимизирующее влияние на течение репаративного остеогенеза, однако вопрос о механизме влияния клеток остается пока открытым.
2. Необходимо дальнейшее изучение субстратов различного происхождения на функциональную активность клеток.
194291, Санкт-Петербург,
пр. Луначарского, д. 49
Тел.: +7 (812) 558-15-15
E-mail: stomus@stomus.ru
www.stomus.ru
Источник: www.dentoday.ru
